Association entre la production de particules de papillomavirus humain et la sévérité de la papillomatose respiratoire récurrente

Nov 21, 2023

Rapports scientifiques volume 13, Numéro d'article : 5514 (2023) Citer cet article

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La papillomatose respiratoire récurrente (RRP) a un large éventail de sévérité. Nous étudions la relation entre la production de particules de papillomavirus humain (HPV) et la gravité de la RRP. De septembre 2005 à juin 2021, 68 échantillons de RRP (provenant de 29 patients) ont été inclus. Le type de VPH a été déterminé. La charge virale du VPH, l'état physique et les caractéristiques démographiques et cliniques ont été évalués. L'immunohistochimie (IHC) a été réalisée pour p16, Ki-67, L1 et E4. Nous avons utilisé NanoSuit-CLEM (microscopie lumineuse et électronique corrélative) et la microscopie électronique à transmission (TEM) pour examiner les échantillons. Le nombre total d'interventions chirurgicales chez les cas HPV positifs et HPV négatifs était de 3,78 (n = 55/68, intervalle : 1-16) et de 1,30 (n = 13/68, intervalle : 1-3), respectivement (p = 0,02 ). L'IHC a montré que L1 et E4 étaient corrélés et exprimés à la surface de la tumeur. NanoSuit-CLEM et TEM ont révélé des particules de VPH dans les noyaux L1-positifs. Les cas positifs à l'IHC L1 avaient un intervalle chirurgical plus court (p < 0,01) et des interventions chirurgicales plus fréquentes (p = 0,04). L'IHC P16, la charge virale et l'état physique n'étaient pas associés à la gravité de la maladie. Cette étude a visualisé pour la première fois la production de particules HPV dans le RRP. L'infection persistante par les particules du VPH était associée à la gravité. Nous suggérons l'IHC L1 pour évaluer la sévérité de la RRP en plus du score de Derkay.

La papillomatose respiratoire récurrente (PRR) est une tumeur bénigne souvent causée par le papillomavirus humain (HPV) de type 6 ou 111,2. La RRP est également connue sous le nom de papillomatose laryngée (LP)3. En général, l'implication du VPH est signalée chez 80 à 96,9 % des patients4,5,6 ; cependant, quelques études ont rapporté un taux inférieur de détection du VPH d'environ 60 %1,2. De plus, certains rapports n'ont pas examiné l'implication du VPH7,8,9. Certains patients restent en rémission après une seule intervention chirurgicale, tandis que d'autres développent une transformation maligne après plusieurs interventions chirurgicales et ont des résultats défavorables10,11. Le score de Derkay, qui évalue la gravité de la maladie en fonction des résultats cliniques, est souvent utilisé pour déterminer la gravité de la RRP12. Cependant, peu d'études ont été menées pour étudier la gravité clinique de la maladie en fonction de sa pathogenèse, comme le cycle de vie du VPH. Étant donné que l'ADN du VPH est détecté dans la muqueuse laryngée des patients en rémission, on pense qu'une infection persistante au VPH est impliquée dans la pathogenèse de RRP13. Cependant, aucun rapport n'a examiné l'association entre l'implication du VPH (ou l'état des particules de VPH produites par les tumeurs) et la gravité de la maladie.

La méthode NanoSuit est une technique biomimétique inspirée par la capacité d'observer des larves de drosophile vivantes à l'aide d'un microscope électronique à balayage à émission de champ (FE-SEM), qui nécessite des conditions de vide poussé14,15. La méthode NanoSuit-CLEM (microscopie lumineuse et électronique corrélative), qui applique la technologie NanoSuit, est une technique qui forme une nanomembrane sur les tissus pathologiques, préservant ainsi la teneur en eau du tissu et maintenant sa structure tridimensionnelle, tandis que la zone sous observation au microscope optique est observé avec un SEM16. Le processus peut être complété en quelques minutes et l'observation FE-SEM peut être facilement effectuée. Nous avons précédemment examiné divers tissus pathologiques tels que le tractus gastro-intestinal et la glande salivaire à l'aide de la méthode NanoSuit-CLEM17,18,19. De plus, nous avons précédemment rapporté des méthodes standard d'observation pour divers virus, tels que le cytomégalovirus, le virus varicelle-zona et le VPH, en utilisant la méthode NanoSuit-CLEM20.

Il a été rapporté que les expressions d'ARNm de HPV E4 et E5 sont élevées dans la RRP et peuvent être impliquées dans la pathogenèse de la maladie21,22. Ainsi, nous avons émis l'hypothèse que la production active de particules HPV serait associée à la sévérité de la RRP car E4 est impliqué dans la formation et la libération des particules HPV.

Dans cette étude, nous avons tenté d'élucider le cycle de vie du VPH dans le RRP en observant les particules de VPH à l'aide de la méthode NanoSuit-CLEM. En outre, nous avons cherché à montrer que la production active de particules HPV est associée à la gravité de la maladie.

Les caractéristiques des patients sont résumées dans le tableau 1 et des données détaillées sont disponibles dans le tableau supplémentaire S1. Nous avons effectué une analyse de séquençage direct pour déterminer le type de VPH (Fig. S1 supplémentaire). L'âge moyen était de 44,83 ans (intervalle : 30–69, SD : 8,67), 57,00 ans (intervalle : 45–69, SD : 12,53) et 60,10 ans (intervalle : 37–86, SD : 16,04) ans chez les patients de type HPV 6, 11 et négatif, respectivement. Tous les cas étaient des RRP de l'adulte et le traitement a été effectué en salle d'opération sous anesthésie générale. Aucun des patients n'a été vacciné contre le VPH. Les patients atteints de RRR étaient principalement des hommes (n = 25/29, 86,2 %), avaient des antécédents de tabagisme (n = 23/29, 79,3 %) et avaient des antécédents de consommation d'alcool (n = 24/29, 82,8 %) . Le nombre total d'interventions chirurgicales était de 3,78 (n = 19/29, intervalle : 1 à 16) chez les cas HPV positifs, et de 1,30 (n = 10/29, intervalle : 1 à 3) chez les cas HPV négatifs (p = 0,02 ). De plus, le score de Derkay était de 6,27 (n = 55/68, intervalle : 3–14) chez les cas HPV positifs, et de 4,84 (n = 13/68, intervalle : 3–8) chez les cas HPV négatifs (p = 0,02 ). Cependant, aucune différence statistiquement significative dans le nombre total de chirurgies et les scores de Derkay n'a été identifiée pour les types de VPH 6 et 11 (p = 0,10). Aucun cas de lésions disséminées des voies respiratoires inférieures n'a été observé. Une transformation maligne s'est produite dans trois cas, tous négatifs pour le VPH.

Les cas de RRP positifs pour le VPH présentaient souvent une koilocytose à la surface de la tumeur (zone entre les lignes pointillées) (Fig. 1A). À la surface de la tumeur, principalement dans les lésions koilocytotiques, le noyau était positif pour l'immunohistochimie L1 (IHC), qui est la protéine de capside du VPH, et la membrane cellulaire était positive pour l'ARNm et la protéine E4, qui sont impliqués dans la formation de particules de VPH. et relâchez (Fig. 1B–E). L1 et E4 sont tous deux exprimés selon une distribution similaire à la surface de la tumeur, certains sites des deux étant positifs dans la même cellule (flèche) (Fig. 1F). P16 IHC a montré une faible dispersion lors de la coloration (Fig. 1G). La coloration au Ki-67 a été principalement observée dans la couche basale, le pourcentage de cellules positives diminuant vers la surface de la tumeur (Fig. 1H).

Découvertes pathologiques. (A) Une lésion koilocytotique avec atypie nucléaire et vacuoles périnucléaires est observée à la surface de la tumeur (zone entre les lignes pointillées). (B,C) [(C) est un agrandissement du carré dans (B)] : HPV L1 IHC montrant des cellules positives dans les lésions koilocytotiques de la surface tumorale (flèche). (D) Hybridation ARN-in situ de la membrane cellulaire exprimée par HPV E4 dans les lésions koilocytotiques de la surface tumorale. (E) HPV E4 IHC et ARN-hybridation in situ sont positifs pour HPV E4 pour la même lésion. (F) HPV L1 et HPV E4 sont exprimés dans une distribution similaire à la surface de la tumeur, certains sites des deux étant positifs dans la même cellule (flèche). Le marron indique HPV L1 et le rouge indique HPV E4. (G) P16 IHC montre une faible dispersion sur la coloration. (H) La coloration IHC Ki-67 est principalement observée dans la couche basale, le pourcentage de cellules positives diminuant vers la surface de la tumeur. Seul (C) est observé à un champ de vision de 400 ×, tandis que les autres sont observés à un champ de vision de 200 ×. Les barres indiquent 100 μm. HPV Papillomavirus humain, IHC Immunohistochimie.

Nous avons utilisé le score immunoréactif (IRS) pour évaluer la coloration p16 IHC (Fig. S2 supplémentaire). P16 IRS était statistiquement significatif dans les cas HPV-positifs par rapport à ceux des cas négatifs (p < 0,01). Cependant, il n'y avait pas de différence statistiquement significative entre les types de VPH 6 et 11 (p = 0,62). (Fig. 2A). L'indice MIB-1 était significativement plus élevé dans les cas HPV positifs que dans les cas HPV négatifs (p < 0,01). Cependant, il n'y avait pas de différence statistiquement significative entre les types de VPH 6 et 11 (p = 0,87) (Fig. 2B). En comparant les cas L1 IHC positifs et négatifs, l'indice MIB-1 était statistiquement plus élevé dans les cas positifs (p <0, 01) (Fig. 2C). De même, E4 IHC était statistiquement plus élevé chez les cas HPV positifs (p <0, 01) (Fig. 2D).

Évaluation quantitative des résultats pathologiques. (A) La coloration P16 est statistiquement significative dans les cas positifs au VPH, les cas positifs au VPH de type 6 et les cas positifs au VPH de type 11 par rapport aux cas négatifs (p < 0,01, p = 0,02 et p = 0,02, respectivement). (B) L'indice MIB-1 est statistiquement significatif dans les cas positifs au VPH, les cas positifs au VPH de type 6 et les cas positifs au VPH de type 11 par rapport aux cas négatifs (tous p < 0,01). (C) L'indice MIB-1 est significativement plus élevé dans les cas HPV L1 positifs que dans les cas négatifs (p < 0,01). (D) L'indice MIB-1 est statistiquement significatif dans les cas HPV E4 positifs que dans les cas négatifs (p < 0,01). * indique p < 0,05 et ** indique p < 0,01. Virus du papillome humain VPH.

Nous avons tenté d'identifier les particules de VPH dans des coupes fixées au formol et incluses en paraffine (FFPE). Nous avons sélectionné le cas 5–2, qui était positif au VPH de type 11 et qui exprimait bien l'IHC L1. Tout d'abord, nous avons effectué une IHC L1 et photographié les sites positifs (Fig. 3A). Ensuite, une incubation d'osmium à 1 % et un dépôt en phase vapeur d'osmium ont été effectués. La section fléchée du noyau L1 IHC-positif a été identifiée à l'aide de FE-SEM (Fig. 3B). Les cellules L1-positives ont été améliorées par la réaction de l'osmium avec la 3–3′-diaminobenzidine (DAB). L'observation du noyau à un grossissement croissant a révélé la présence de nombreuses microparticules (Fig. 3C – G). Les particules typiques d'environ 50 à 60 nm, de la même taille que les particules de VPH, sont indiquées par des pointes de flèche (Fig. 3G).

Détection des particules HPV dans les cellules HPV L1-positives. (A) HPV L1 IHC est effectuée, et la flèche indique l'objet d'observation. Les noyaux cellulaires sont indiqués par des flèches. Un champ de vision de 400 × est observé. La barre indique 100 μm. (B–G) Les noyaux cellulaires HPV L1 IHC-positifs sont observés à l'aide de la méthode NanoSuit-CLEM. Les noyaux sont remplis de microparticules. Les particules typiques d'environ 50 à 60 nm, de la même taille que les particules de VPH, sont indiquées par des pointes de flèche (G). Le champ de vision des images est de 500 × (B), 3000 × (C), 10 000 × (D), 30 000 × (E), 50 000 × (F) et 100 000 × (G). Les barres indiquent 100 μm (B), 10 μm (C), 5,0 μm (D), 1,0 μm (E), 1,0 μm (F) et 500 nm (G). (H) HPV L1 IHC est effectuée. La flèche indique l'objet d'observation. Le champ de vision est de 200 × . Les barres indiquent 100 μm. (I, J) Les noyaux cellulaires HPV L1 IHC-positifs sont observés à l'aide de la méthode NanoSuit-CLEM. Les noyaux sont remplis de microparticules. Les champs de vision sont 5000 × (I) et 30 000 × (J). Les barres indiquent 10 μm (I) et 1,0 μm (J). (K – M) Les zones sont observées par la méthode NanoSuit-CLEM en utilisant TEM. Des microparticules d'environ 50 à 60 nm sont observées dans le noyau et déterminées comme étant des particules de VPH. Les particules HPV représentatives sont indiquées par des pointes de flèches (M). Le grossissement est de 5 000 × (K), 30 000 × (L) et 50 000 × (M). Les barres indiquent 2,0 μm (K), 200 nm (L) et 200 nm (M). CLEM Microscopie optique et électronique corrélative, HPV Human papillomavirus, IHC Immunohistochimie.

Ensuite, nous avons tenté des observations TEM des microparticules dans le noyau en utilisant FE-SEM. L'IHC pour L1 a été réalisée (Fig. 3H), la solution NanoSuit II a été appliquée et l'échantillon a été examiné à l'aide de FE-SEM. Les noyaux cellulaires L1-positifs étaient remplis de microparticules (Fig. 3I, J). Ensuite, le tissu observé sur les lames de verre a été noyé dans de la résine époxy et des coupes d'échantillons ultraminces ont été préparées et observées par TEM. Les mêmes noyaux observés par FE-SEM ont également été observés en utilisant TEM. De nombreuses microparticules d'environ 50 à 60 nm ont été trouvées dans les noyaux de cellules L1-positives (Fig. 3K – M). Ainsi, nous avons conclu que les particules dans les noyaux L1-positifs étaient des particules de VPH.

De plus, nous avons tenté de déterminer si les particules de VPH apparaissent différemment dans chaque type de VPH et comment les particules se forment. Dans les cas HPV de type 6 et 11 positifs, l'IHC L1 était fortement positif en utilisant la microscopie optique dans les couches superficielles de la tumeur, et ces cellules se sont avérées remplies de microparticules dans le noyau en utilisant FE-SEM (Fig. 4A, B,G,H). Dans les couches légèrement inférieures, dans les cas HPV de types 6 et 11 positifs, L1 IHC était légèrement positif par microscopie optique, et les structures de particules dans le noyau étaient réduites en nombre et indistinctes (Fig. 4A, C, G, I) . Aucune cellule L1 IHC-positive n'a été trouvée dans la couche granulaire, épineuse et basale en utilisant la microscopie optique, et aucune structure de microparticules n'a été observée dans le noyau (Fig. 4A, D – G, J – L). Aucune différence morphologique dans les microparticules n'a été observée entre les types de HPV 6 et 11. Dans le cas HPV négatif, aucune cellule L1 IHC-positive n'a été trouvée en microscopie optique et aucune structure de microparticules n'a été observée dans les noyaux (Fig. 4M – R) .

Processus de formation de particules HPV. (A–F) Le processus de formation de particules dans le cas du VPH de type 6. L'IHC HPV L1 est réalisée et les flèches indiquent l'objet d'observation. Un champ de vision de 200 × est observé. La barre indique 100 μm (A). Dans les zones où le HPV L1 IHC est fortement coloré (B), de nombreuses particules de HPV sont observées, alors que dans les zones où le HPV L1 IHC est faiblement coloré (C), le nombre de particules de HPV est réduit et certaines particules semblent immatures. Zones où les lésions HPV L1 IHC-négatives ne montrent aucune particule HPV (D–F). À 50 000 × champ de vision, la barre blanche indique 1,0 μm (B – F). (G–L) Le processus de formation des particules dans les cas de VPH de type 11. L'IHC HPV L1 est réalisée et les flèches indiquent l'objet observé. Un champ de vision de 200 × est observé. La barre noire indique 100 μm (G). Dans les zones où HPV L1 IHC est fortement coloré (H), de nombreuses particules de HPV sont observées, alors que dans les zones où L1 est faiblement coloré (I), le nombre de particules de HPV est réduit et certaines particules semblent immatures. Zones où les lésions HPV L1 IHC-négatives ne montrent aucune particule HPV (J–L). À 50 000 × champ de vision, la barre blanche indique 1,0 μm (H – L). (M–R) Cas HPV négatif. L'IHC HPV L1 est réalisée et les flèches indiquent l'objet observé. Un champ de vision de 200 × est observé. La barre noire indique 100 μm (M). Aucune particule de VPH n'est observée (N–R). À 50 000 × champ de vision, la barre blanche indique 1,0 μm (N – R). HPV Papillomavirus humain, IHC Immunohistochimie.

Nous avons ensuite examiné la gravité clinique des cas L1 IHC-positifs, qui se caractérisent par une production active de particules HPV. Sur la figure 5A, la couleur de la barre indique le minutage de l'intervalle chirurgical et la longueur représente chaque intervalle chirurgical. L'étoile indique un IHC L1 positif. Le nombre de cas positifs à l'IHC L1 était inégalement réparti, le nombre de chirurgies était élevé et l'intervalle chirurgical était court (Fig. 5A). Le nombre de chirurgies était significativement plus élevé chez les patients L1 IHC-positifs (p = 0,04) (Fig. 5B). De plus, l'intervalle chirurgical était significativement plus court chez les patients L1 IHC-positifs (p < 0,01) (Fig. 5C).

Association entre l'IHC L1 et la gravité clinique. (A) L'IHC HPV L1 est positive dans certains cas, avec un nombre élevé de chirurgies et des intervalles chirurgicaux courts. L'axe vertical indique le nombre de cas et l'axe horizontal indique le nombre de jours. La couleur de la barre indique la durée de l'intervalle chirurgical et la longueur représente chaque intervalle chirurgical. Les étoiles indiquent la positivité HPV L1 IHC. (B) Le nombre total de chirurgies est significativement plus élevé dans les cas L1 IHC-positifs (p = 0,04). (C) L'intervalle entre les chirurgies est significativement plus court dans les cas L1 IHC-positifs (p < 0,01). *Indique p < 0,05 et ** indique p < 0,01. HPV Papillomavirus humain, IHC Immunohistochimie.

Ensuite, nous avons examiné la charge virale et l'état physique. La charge virale du VPH ne différait pas entre les types de VPH 6 et 11 (p = 0, 96) (Fig. 6A), et le nombre de cas de VPH de type 11 était significativement plus faible dans E2/E6 (p < 0, 01) (Fig. 6B). Ce résultat indique que le HPV de type 11 est plus intégré que le type 6. La charge virale HPV et E2/E6 n'ont montré aucune corrélation avec l'indice MIB-1 (r = 0,07, p = 0,66 et r = 0,12, p = 0,44) (Fig. .6C,D).

Évaluation de la charge virale HPV et de l'état physique. (A) La charge virale ne montre aucune différence entre les types de VPH 6 et 11 (p = 0,96). (B) Les niveaux de HPV de type 11 sont significativement plus faibles dans E2/E6 (p < 0,01). (C) La charge virale ne montre aucune corrélation avec l'indice MIB-1 (r = 0,07, p = 0,66). (D) E2/E6 ne montre aucune corrélation avec l'indice MIB-1 (r = 0,12, p = 0,44). **Indique p < 0,01. Virus du papillome humain VPH.

Nous avons également évalué la corrélation entre le score de Derkay et l'IHC, la charge virale HPV, l'état physique et l'intervalle chirurgical. La positivité IHC L1 était définie comme 1 et négative comme 0. La positivité IHC L1 était associée à un score de Derkay élevé (odds ratio : 1,28, intervalle de confiance à 95 % : 1,04–1,57, p = 0,02). L'indice MIB-1 et le score de Derkay, une mesure de la gravité, affichaient une faible corrélation positive (r = 0,23, p = 0,07) (Fig. 7A). En revanche, p16 IHC, un marqueur de substitution pour le VPH dans le carcinome oropharyngé, et les scores de Derkay présentaient une faible corrélation négative (r = - 0, 23, p = 0, 06) (Fig. 7B). Puisque la positivité IHC L1 et le score de Derkay étaient associés, nous nous attendions à ce que la charge virale HPV et E2/E6 soient corrélés avec le score de Derkay ; cependant, aucune corrélation n'a été observée (r = - 0, 004, p = 0, 976 et r = 0, 006, p = 0, 966, respectivement) (Fig. 7C, D).

Nuages ​​de points et droites de régression pour le score de Derkay. (A) L'indice MIB-1 et le score de Derkay montrent une faible corrélation positive (r = 0,23, p = 0,07). (B) Les scores P16 IHC et Derkay montrent une faible corrélation négative (r = − 0,23, p = 0,06). (C) La charge virale et les scores de Derkay ne montrent aucune corrélation (r = - 0,004, p = 0,976). (D) Les scores E2/E6 et Derkay ne montrent aucune corrélation (r = 0,006, p = 0,966). (E) Il n'y a pas de tendance significative dans le changement moyen du score de Derkay à chaque fois de la chirurgie. (F) L'intervalle chirurgical et le score de Derkay montrent une corrélation négative (r = − 0,40, p = 0,01). IHC Immunohistochimie, score DS Derkay.

Aucune tendance significative n'a été observée dans la variation moyenne du score de Derkay à chaque temps opératoire (Fig. 7E). L'intervalle chirurgical et le score de Derkay affichaient une corrélation négative (r = − 0,40, p = 0,01) (Fig. 7F). Cela montre que l'intervalle chirurgical pourrait être un indicateur utile de la gravité.

Le VPH est un virus à ADN double brin d'une taille d'environ 50 à 60 nm sans enveloppe23. Étant donné que l'ADN du VPH est détecté dans la muqueuse laryngée en rémission, on pense que l'infection persistante est la pathogenèse de RRP13. Dans cette étude, l'IHC a révélé que L1, qui est une protéine de capside, et E4, qui est impliquée dans la formation de particules de VPH24,25, étaient corrélées dans le tissu RRP. De plus, l'observation de cellules L1 IHC-positives par NanoSuit-CLEM et TEM a révélé que les noyaux étaient remplis de microparticules d'environ 50 à 60 nm, alors que des résultats similaires n'ont pas été observés dans les noyaux cellulaires L1 IHC-négatifs, indiquant que ces particules étaient Particules de VPH. De plus, cette étude suggère que les particules de VPH commencent à former la couche superficielle de la tumeur et augmentent en nombre à mesure qu'elles se déplacent vers le haut. Cette étude a prouvé pour la première fois que des particules de VPH sont produites en continu dans les RRP sévères, ce qui peut entraîner une infection persistante. En d'autres termes, nous avons réussi à visualiser une partie du cycle de vie du VPH dans le RRP avec des sections FFPE.

Cette étude s'est également concentrée sur l'implication du VPH. La fréquence du VPH serait supérieure à 80 % sur la base d'articles récents sur la RRP4,5,6, mais quelques rapports ont démontré une implication du VPH d'environ 60 %1,2. Des rapports existent également où un diagnostic clinique a été posé sans examiner si oui ou non le VPH est impliqué7,8,9. Nous avons examiné le VPH par PCR, L1 IHC, E4 IHC et qPCR pour E2/E6, qui sont tous indétectables dans les cas HPV négatifs. Ces résultats indiquent la présence de cas HPV négatifs même dans les cas pathologiques de papillome diagnostiqués cliniquement comme RRP. Dans la LP à l'âge adulte, le groupe d'âge était inférieur pour les cas HPV positifs. Des mutations génétiques du RAS ont été rapportées chez des cas HPV négatifs26. Ils pourraient être plus âgés puisque la mutation génétique est l'étiologie principale. Les données actuelles ont également montré une tendance vers un âge plus avancé chez les RRP HPV-négatifs. D'autre part, l'âge des RRP HPV de types 6 et 11 positifs n'était pas différent dans de nombreux rapports ; par conséquent, la différence significative dans cette étude pourrait être attribuée à la petite taille de l'échantillon.

En raison du large éventail de gravité de la RRP, il est crucial de déterminer la gravité de la maladie. Le score de Derkay est un outil d'évaluation largement utilisé. Une étude examinant 721 patients atteints de RRP juvénile a rapporté qu'un score de Derkay élevé était un facteur de risque de récidive27. Cependant, deux limites du score de Derkay sont que le score ne peut pas prédire le site de récidive, et le score peut varier d'un évaluateur à l'autre puisqu'il n'existe aucun critère clair pour la taille de la tumeur ou d'autres facteurs. Un autre facteur de risque bien connu est l'implication du type HPV 1127,28,29. Dans cette étude, le nombre de chirurgies ne différait pas entre les types de VPH 6 et 11 ; cependant, il y avait une différence statistiquement significative entre les patients HPV-positifs et HPV-négatifs. De plus, nous avons constaté que l'intervalle chirurgical était plus court et que le nombre d'interventions chirurgicales était plus élevé chez les cas positifs à l'IHC L1, ce qui indique une production active de particules de VPH. Ces résultats suggèrent que la production persistante de particules de VPH, entraînant une infection persistante, est la principale pathogenèse de la RRP. Il a été rapporté que la combinaison de la chirurgie et de la vaccination contre le VPH réduisait le risque de récidive30,31. Ces rapports confirment cette hypothèse. Le délai de diagnostic pourrait être un facteur de confusion. Cependant, en regardant les cas L1 IHC positifs dans cette étude, ils ont tendance à être positifs quelles que soient les chirurgies pratiquées (Fig. 5A et Tableau supplémentaire S1, Cas 5, 8, 22, 23). De plus, même des intervalles chirurgicaux courts peuvent survenir avec une positivité IHC L1. Ainsi, les facteurs liés au patient, tels que la réponse immunitaire, pourraient être plus pertinents que le temps. De plus, nous avons constaté que la positivité de l'IHC L1 était associée à un score de Derkay élevé ; cependant, l'IHC L1 et le score de Derkay pourraient évaluer différents aspects. Il est peu probable que le score de Derkay soit considéré comme élevé sans lésions multiples et ne permet pas d'évaluer la physiopathologie d'une infection persistante au VPH. De plus, L1 IHC n'est pas en mesure d'évaluer la tumeur entière car il n'évalue que le tissu sur la lame de verre ; cependant, il démontre des preuves solides de la production active de particules de VPH. Ainsi, le score de Derkay et la formation de particules HPV pourraient évaluer différents aspects de la RRP. En revanche, une faible corrélation négative a été observée entre le score de Derkay et p16 IHC, un marqueur de substitution connu pour HPV32,33. Par conséquent, nous suggérons de tester l'IHC L1 en plus du score de Derkay pour évaluer avec précision la gravité de la RRP.

Nous avons également examiné la charge virale et l'état physique. La charge virale ne différait pas entre les types de VPH 6 et 11, mais le type de VPH 11 était dominant de type intégré. En revanche, la charge virale et l'état physique n'étaient pas corrélés avec l'indice MIB-1. De plus, la charge virale et l'état physique n'étaient pas corrélés avec le score de Derkay. Des rapports antérieurs ont révélé que la charge virale diminuait progressivement à chaque intervention chirurgicale jusqu'à l'obtention d'une rémission34, tandis que d'autres ont montré que la charge virale et l'état physique ne sont pas liés au volume de la tumeur22 ; par conséquent, aucun consensus n'existe. La charge virale variait considérablement au sein d'un même cas. La charge virale peut varier en fonction du site échantillonné. Cependant, comme les échantillons n'ont pas été prélevés séparément pour chaque sous-site, nous n'avons pas pu examiner ce point. Des recherches supplémentaires sont nécessaires pour élucider ces résultats; cependant, la charge virale et l'état physique ne semblent pas être des indicateurs de gravité clinique.

Nous avons identifié des particules de VPH dans les coupes FFPE, et l'observation de particules de VPH était associée à la sévérité de la RRP. Cependant, cette étude présentait plusieurs limites. Le nombre de cas dans cette étude était faible, bien que 29 cas puissent être considérés comme un échantillon relativement important pour une étude RRP. Cette étude n'incluait pas la RRP d'apparition juvénile, les patients vaccinés contre le VPH et les lésions des voies respiratoires inférieures ; ainsi, si L1 IHC est efficace dans de tels cas reste incertain. Bien que l'intervalle de récidive plutôt que l'intervalle chirurgical semble être un meilleur indicateur, l'intervalle chirurgical a été utilisé comme indicateur dans cette étude car il était difficile de déterminer avec précision le moment de la récurrence. Cependant, comme l'intervalle chirurgical est en corrélation avec le score de Derkay, il peut être un indicateur utile de la gravité. Tous les patients avec transformation maligne étaient HPV-négatifs. Un rapport de Taïwan a suggéré que le statut HPV négatif est un facteur de risque de transformation maligne35. Ainsi, bien que le statut HPV négatif puisse être un facteur de risque de transformation maligne, nous n'avons pas étudié ce point en détail.

En conclusion, en utilisant NanoSuit-CLEM et TEM, nous avons réussi pour la première fois à visualiser une partie du cycle de vie HPV des RRP dans les coupes FFPE. Une infection persistante par des particules de VPH due à la production continue de particules de VPH est corrélée à la gravité clinique. L'IHC L1 est important pour évaluer la sévérité de la RRP en plus du score de Derkay.

Soixante-huit échantillons de RRP ont été obtenus de 29 patients ayant subi une intervention chirurgicale à l'école de médecine de l'Université de Hamamatsu, à l'hôpital général Seirei Hamamatsu, à l'hôpital général Seirei Mikatahara et à l'hôpital général municipal de Fujieda. Les échantillons ont été obtenus de septembre 2005 à juin 2021. Tous les cas ont été pathologiquement diagnostiqués comme papillome avant d'être inclus dans l'étude. Dans tous les cas, une ablation totale de la tumeur a été effectuée à chaque fois, et les cas où la tumeur était restée ont été exclus. Dans la mesure du possible, la chirurgie a été réalisée dans les quelques mois suivant l'observation de la récidive. Le protocole d'étude a été approuvé par le comité d'examen institutionnel de l'école de médecine de l'université de Hamamatsu (numéro d'approbation : 19-222). Toutes les méthodes ont été réalisées conformément à la Déclaration d'Helsinki. Un consentement éclairé écrit a été obtenu de tous les patients. Les informations médicales, y compris l'âge du patient, le sexe, l'exposition à l'alcool, le statut tabagique, le score de Derkay et la date de la chirurgie, ont été extraites des dossiers des patients.

Le score de Derkay est une méthode d'évaluation de la gravité largement utilisée. La formule du score de Derkay est « la somme des points calculés à partir de la taille de la tumeur à chaque site » plus « les points calculés à partir des résultats cliniques ». L'évaluation de la taille de la tumeur est basée sur le tractus aérodigestif divisé en 25 sous-sites, chacun d'eux étant noté de 0 à 3 (0 = pas de lésion, 1 = lésion de surface, 2 = lésion surélevée et 3 = lésion volumineuse). L'évaluation des résultats cliniques est basée sur la voix du patient (0 = normal, 1 = anormal et 2 = aphonique), le stridor du patient (0 = absent, 1 = présent avec activité et 2 = présent au repos), l'urgence de l'intervention d'aujourd'hui (0 = programmé, 1 = électif, 2 = urgent et 3 = urgent) et le niveau de détresse respiratoire (0 = aucun, 1 = léger, 2 = modéré, 3 = sévère et 4 = extrême)12.

Le tissu pour l'extraction d'ADN a été prélevé dans la zone avec le plus grand volume de tumeur. Dans les cas où l'échantillonnage des tissus pour cette étude était inadéquat, l'ADN a été extrait du tissu FFPE. L'ADN a été extrait à l'aide d'un kit QIAamp DNA Mini ou d'un kit QIAamp DNA FFPE Tissue (Qiagen, Hilden, Allemagne). Le jeu d'amorces TaKaRa PCR Human Papillomavirus Typing Set (Takara Bio, Kusatsu, Japon) a été utilisé pour détecter le VPH. Les échantillons qui ont été détectés comme HPV positifs par PCR ont été soumis à une analyse de séquençage direct à l'aide d'un analyseur génétique 3500xL (Applied Biosystems, Waltham, MA, USA). Le type de VPH a été déterminé en recherchant des séquences à l'aide de BLAST (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/).

La charge virale du VPH de type 6 ou 11 et l'état physique ont été évalués par qPCR à l'aide du système de PCR en temps réel StepOne (Applied Biosystems, Waltham, MA, USA). Des amorces pour les HPV de type 6 et 11 spécifiques E2 et E6 et l'actine bêta ont été conçues (tableau supplémentaire S2). Les courbes standard pour E2, E6 et l'actine bêta ont été définies à l'aide d'un plasmide de clonage comme décrit précédemment 21,22,34. Le nombre de copies E6 par nanogramme d'ADN a été défini comme la charge virale. Le rapport nombre de copies E2/nombre de copies E6 représente l'état physique du VPH. E2/E6 < 1 indique qu'il existe à la fois des formes intégrées et épisomiques (mixtes), E2/E6 ≥ 1 indique la prédominance de la forme épisomique et E2/E6 = 0 indique une forme intégrée uniquement36.

Des coupes de tissu FFPE (4 μm d'épaisseur) ont été préparées. La récupération d'antigène a été effectuée à l'aide de la solution de récupération d'épitope pH 9 (Leica Biosystems, Wetzlar, Allemagne). Pour bloquer l'activité peroxydase endogène, les coupes ont été incubées dans une solution de H2O2 à 0,3 % dans du méthanol. Du sérum de chèvre à dix pour cent (Nichirei Bioscience, Tokyo, Japon) a été utilisé pour bloquer les coupes. Les principaux anticorps utilisés étaient l'anticorps HPV-L1 (K1H8) (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA), p16 (E4H6) (Roche, Bâle, Suisse) et Ki-67 (MIB-1) (DAKO, Santa Clara , Californie, États-Unis). Les anticorps HPV type 6 E4 et type 11 E4, comme décrit précédemment, ont également été utilisés21. Pour les anticorps secondaires, un kit MAX-PO(M) ou MAX-PO(R) (Nichirei Bioscience, Tokyo, Japon) a été utilisé. Les sections ont été visualisées avec DAB.

La double coloration L1 et E4 a été réalisée par L1 et visualisée par DAB, et E4 a été visualisée à l'aide du kit de substrat ImmPACT Vector Red AP (Vector Laboratories, Newark, CA, USA).

Les évaluations IHC ont été effectuées indépendamment par deux pathologistes qui n'avaient pas accès aux informations sur les patients. L'IHC a été évalué comme positif ou négatif pour L1 et E4, l'indice MIB-1 a été calculé en pourcentage de cellules positives pour l'IHC Ki-67/cellules tumorales totales, et p16 a été calculé en tant que score immunoréactif (IRS) en utilisant l'intensité de la coloration en pourcentage des cellules tumorales positives (Suppl. Fig. S2)37.

Des sondes HPV de type 6 E4 et de type 11 E4 ont été utilisées. Le protocole a été décrit précédemment21,22. En bref, des sondes marquées à la digoxigénine ont été préparées et hybridées pendant une nuit à 60°C. La détection a été effectuée par une solution de nitrobleu tétrazolium/5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate.

Une IHC avec l'anticorps L1 a été réalisée (colorée au DAB). Ensuite, des images des zones à observer par FE-SEM ont été obtenues. Les lames ont été incubées avec une solution d'osmium à 1% pendant 5 min. L'osmium réagit spécifiquement avec le DAB et est amélioré lorsqu'il est observé à l'aide de FE-SEM38. Le dépôt en phase vapeur d'osmium a été réalisé à l'aide d'une coucheuse d'osmium (HPC-1SW) (Appareil sous vide, Mito, Japon). Le microscope électronique à balayage à émission de champ Hitachi S-4800 (Hitachi, Tokyo, Japon) a été utilisé pour les observations FE-SEM et fonctionnait à une tension d'accélération de 5,0 kV. Les images ont été capturées en mode électronique rétrodiffusé yttrium-aluminium-grenat (YAG-BSE).

Tissu FFPE Sectes. (8 µm d'épaisseur) ont été préparés à partir de verre non revêtu. La solution NanoSuit II (Nisshin EM, Tokyo, Japon) a été appliquée sur les lames, qui ont été tournées à 3000 tr/min par spin coater pour créer un nanofilm. Ensuite, des observations FE-SEM ont été effectuées. Les coupes de tissu FFPE sur lame de verre ont été refixées avec 2% de glutaraldéhyde et 2% de tétroxyde d'osmium, et noyées dans de la résine époxy (Nisshin EM, Tokyo, Japon). Des blocs (0,5 mm2) ont été découpés pour unifier la zone d'observation FE-SEM. Des lames ultrafines (60 à 80 nm) ont été préparées et colorées avec de l'acétate de plomb et de l'acétate d'uranium. JEM-1400 (JEOL, Tokyo, Japon) a été utilisé pour les observations en microscopie électronique à transmission (MET).

Les données des deux populations des deux catégories ont été soumises au test exact de Fisher. Le test exact de Fisher a été réalisé à l'aide de tests bilatéraux. Les données pertinentes comprenaient le sexe, le tabagisme, l'alcool et la transformation maligne. Le test t de Welch a été appliqué pour comparer les deux ensembles de données. Un test t de Welch a été réalisé à l'aide de tests bilatéraux. Les données pertinentes comprenaient l'âge, le nombre total de chirurgies, le score de Derkay, les données IHC et la charge virale. Comme ces données n'ont pas montré d'homogénéité de la variance, le test t de Welch a été effectué. Le coefficient de corrélation produit-moment de Pearson a été utilisé pour évaluer la force de la relation linéaire entre les deux données ou variables aléatoires. Une analyse de régression logistique binomiale a été appliquée pour déterminer l'association entre L1 IHC et le score de Derkay. La signification statistique a été fixée à p < 0,05. Les analyses statistiques ont été effectuées à l'aide de SPSS ver.26 (IBM Corp., Armonk, NY, USA) et KyPlot ver.6.0.2 (KyensLab, Tokyo, Japon).

Toutes les données générées ou analysées au cours de cette étude sont incluses dans cet article publié et ses fichiers d'informations supplémentaires.

Orita, Y. et al. Le papillome épidermoïde du larynx est fortement associé au papillomavirus humain. Jpn. J.Clin. Oncol. Rév. 48, 350–355 (2018).

Article PubMed Google Scholar

Davids, T., Muller, S., Wise, JC, Johns, MM et Klein, A. Dysplasie associée à la papillomatose laryngée dans la population adulte : mise à jour sur la prévalence et le sous-typage du VPH. Anne. Otol. Rhinol. Laryngol. 123, 402–408 (2014).

Article PubMed Google Scholar

Rivera, GA & Morell, F. Papillomes laryngés (StatPearls Publishing, 2022).

Google Scholar

Amiling, R. et al. Papillomatose respiratoire récurrente d'apparition juvénile aux États-Unis, épidémiologie et types de VPH - 2015-2020. J. Infection pédiatrique. Dis. Soc. 10, 774–781 (2021).

Article PubMed Google Scholar

Bédard, MC et al. La souche HPV prédit la gravité de la papillomatose respiratoire récurrente d'apparition juvénile avec des implications pour le dépistage de la maladie. Cancers (Bâle) 13, 2556 (2021).

Article CAS PubMed Google Scholar

Carvalho, AMAS et al. Papillomatose respiratoire récurrente : caractéristiques cliniques et génotypage viral dans une population brésilienne. Rév. Inst. Méd. Trop. São Paulo 63, e63 (2021).

Article PubMed PubMed Central Google Scholar

Tkaczuk, A. et al. Bevacizumab parentéral pour le traitement de la papillomatose respiratoire sévère dans une population adulte. Laryngoscope 131, E921–E928 (2021).

Article CAS PubMed Google Scholar

Benoît, PA et al. Etude prospective multicentrique de la distribution anatomique de la papillomatose respiratoire récurrente. Laryngoscope 132, 2403–2411 (2022).

Article PubMed Google Scholar

Robbins, Y. et al. Blocage double PD-L1 et TGF-b chez les patients atteints de papillomatose respiratoire récurrente. J. Immunother. Cancer 9, 1–9 (2021).

Article Google Scholar

Kanazawa, T. et al. Rare cas de transformation maligne de papillomatose respiratoire récurrente associée à une infection à papillomavirus humain de type 6 et à une surexpression de p53. Springerplus 2, 2–7 (2013).

Article Google Scholar

Allen, CT et al. Sécurité et activité clinique du blocage de PD-L1 chez les patients atteints de papillomatose respiratoire récurrente agressive. J. Immunother. Cancer 7, 1–9 (2019).

Article CAS Google Scholar

Derkay, CS et al. L'invention concerne un système de stadification pour évaluer la gravité de la maladie et la réponse au traitement dans la papillomatose respiratoire récurrente. Laryngoscope 108, 935–937 (1998).

Article CAS PubMed Google Scholar

Steinberg, BM, Topp, WC, Schneider, PS et Abramson, AL Infection par le papillomavirus laryngé pendant la rémission clinique. N. Engl. J. Med. 308, 1261-1264 (1983).

Article CAS PubMed Google Scholar

Takaku, Y. et al. Une fine membrane polymère, nano-combinaison, améliorant la survie à travers le continuum entre l'air et le vide poussé. Proc. Natl. Acad. Sci. États-Unis 110, 7631–7635 (2013).

Article ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Hariyama, T. et al. Microscopie et biomimétique : La méthode NanoSuit® et la plateforme de recherche d'images. Microscopie (Oxford) 71, 1–12 (2022).

Article CAS Google Scholar

Kawasaki, H. et al. La méthode NanoSuit : Une nouvelle approche histologique pour examiner les coupes de paraffine de manière non destructive par microscopie optique et électronique corrélative. Laboratoire. Investir. 100, 161-173 (2020).

Article CAS PubMed Google Scholar

Shinmura, K. et al. Utilité de l'analyse élémentaire par microscopie électronique à balayage utilisant la méthode de microscopie lumineuse et électronique corrélative «NanoSuit» dans le diagnostic du dépôt de phosphate de lanthane dans la muqueuse œsophagogastroduodénale. Diagnostics 10, 1 (2020).

Article CAS Google Scholar

Ooishi, M. et al. Diagnostic des dépôts de résine échangeuse d'ions dans les coupes de paraffine à l'aide de la méthode corrective de microscopie optique et électronique-nanosuit. Diagnostics 11, 1193 (2021).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Shinmura, K. et al. Identification et caractérisation des tumeurs primaires des glandes salivaires à cils positifs présentant une différenciation basaloïde/myoépithéliale. J. Pathol. 254, 519-530 (2021).

Article CAS PubMed Google Scholar

Itoh, T. et al. Identification des particules virales actives de progéniture dans des sections fixées au formol et incluses en paraffine à l'aide de la lumière corrélative et de la microscopie électronique à balayage. Laboratoire. Investir. 103, 100020 (2023).

Article PubMed Google Scholar

Ikegami, T. et al. Développement d'anticorps contre HPV-6 et HPV-11 pour l'étude du papillome laryngé. Virus 13, 1–14 (2021).

Article Google Scholar

Ikegami, T. et al. Expression coordonnée des gènes du VPH-6 avec une expression prédominante de E4 et E5 dans le papillome laryngé. Micro-organismes 9, 1–18 (2021).

Article Google Scholar

Doorbar, J. et al. La biologie et le cycle de vie des papillomavirus humains. Vaccin 30, F55–F70 (2012).

Article CAS PubMed Google Scholar

Doorbar, J. La protéine E4; la structure, la fonction et les modes d'expression. Virologie 445, 80–98 (2013).

Article CAS PubMed Google Scholar

Wakabayashi, R., Nakahama, Y., Nguyen, V. & Espinoza, JL L'interaction hôte-microbe dans la carcinogenèse induite par le papillomavirus humain. Microorganismes 7, 1–22.

Article Google Scholar

Sasaki, E., Masago, K., Fujita, S., Hanai, N. & Yatabe, Y. Mutations fréquentes de KRAS et HRAS dans les papillomes épidermoïdes de la tête et du cou. J. Pathol. Clin. Rés. 6, 154-159 (2020).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Qu, X., Xiao, Y., Ma, L., Niu, Z. et Wang, J. Taux de récidive élevé chez les patients atteints de papillomatose respiratoire juvénile et ses facteurs de risque. EUR. Cambre. Otorhinolaryngol. 279, 4061–4068 (2022).

Article PubMed Google Scholar

Gerein, V., Rastorguev, E., Gerein, J., Draf, W. & Schirren, J. Incidence, âge au début et raisons potentielles de la transformation maligne chez les patients atteints de papillomatose respiratoire récurrente : 20 ans d'expérience. Otolaryngol. Chirurgie de la tête et du cou. 132, 392–394 (2005).

Article PubMed Google Scholar

Reidy, PM et al. Intégration du papillomavirus humain de type 11 dans le cancer récurrent associé au papillome respiratoire. Laryngoscope 114, 1906–1909 (2004).

Article PubMed Google Scholar

Smahelova, J. et al. Résultats après vaccination contre le papillomavirus humain chez les patients atteints de papillomatose respiratoire récurrente : un essai clinique non randomisé. JAMA Otolaryngol. Chirurgie de la tête et du cou. 148, 654–661 (2022).

Article PubMed Google Scholar

Matsuzaki, H. et al. Effet pluriannuel de la vaccination contre le papillomavirus humain sur la papillomatose respiratoire récurrente. Laryngoscope 130, 442–447 (2020).

Article PubMed Google Scholar

Klingenberg, B. et al. La surexpression de P16INK4A est fréquemment détectée dans le tissu des amygdales sans tumeur sans association avec le VPH. Histopathologie 56, 957–967 (2010).

Article PubMed Google Scholar

Singhi, AD & Westra, WH Comparaison de l'hybridation in situ du papillomavirus humain et de l'immunohistochimie p16 dans la détection du cancer de la tête et du cou associé au papillomavirus humain sur la base d'une expérience clinique prospective. Cancer 116, 2166-2173 (2010).

Google Scholar PubMed

Deng, Z. et al. Méthylation des sites CpG dans la région régulatrice en amont, état physique et expression de l'ARNm du VPH-6 dans le papillome laryngé de l'adulte. Oncocible 8, 85368–85377 (2017).

Article PubMed PubMed Central Google Scholar

Lee, LA et al. Incidence élevée de transformation maligne du papillome laryngé à Taiwan. Laryngoscope 118, 50–55 (2008).

Article PubMed Google Scholar

Ikegami, T. et al. Détection du papillomavirus humain dans les kystes des fentes branchiales. Oncol. Lett. 16, 1571-1578 (2018).

PubMed PubMed Central Google Scholar

Remmele, W. & Stegner, HE Recommandation pour une définition uniforme d'un score immunoréactif (IRS) pour la détection immunohistochimique des récepteurs aux œstrogènes (ER-ICA) dans les tissus cancéreux du sein. Pathologie. 8, 138-140 (1987).

CAS PubMed Google Scholar

Arai, Y. et al. La technique d'amélioration des métaux lourds pour la diaminobenzidine en immunohistochimie permet une observation ultrastructurale par microscopie électronique à balayage à faible vide. J. Histochem. Cytochem. 70, 427–436 (2022).

Article CAS PubMed Google Scholar

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Les auteurs tiennent à remercier Yoshiro Otsuki, Isao Ohta, Yuko Mohri et Hiromi Suzuki pour leur excellent support technique. De plus, nous apprécions le Centre prééminent de formation et de recherche en photonique médicale de l'École de médecine de l'Université de Hamamatsu pour nous avoir permis d'utiliser leur équipement.

Cette étude a été financée par une subvention pour la recherche scientifique, Japan Society for the Promotion of Science (Nos. 20K09689, 20K18249, 20K18250 et 20K18277) du ministère de l'Éducation, de la Culture, des Sports, des Sciences et de la Technologie du Japon. et une subvention HUSM.

Département d'oto-rhino-laryngologie/chirurgie cervico-faciale, École de médecine de l'Université de Hamamatsu, 1-20-1 Handayama Higashi-ku, Hamamatsu, Shizuoka, 431-3192, Japon

Satoshi Yamada, Atsushi Imai, Daiki Mochizuki, Hiroshi Nakanishi, Ryuji Ishikawa, Junya Kita, Yuki Nakamura, Yoshinori Takizawa et Kiyoshi Misawa

Centre prééminent d'éducation et de recherche en photonique médicale Institute for NanoSuit Research, Hamamatsu University School of Medicine, 1-20-1 Handayama Higashi-ku, Hamamatsu, Shizuoka, 431-3192, Japon

Satoshi Yamada, Toshiya Itoh, Takahiko Hariyama et Hideya Kawasaki

Département d'obstétrique et de gynécologie, École de médecine de l'Université de Hamamatsu, Hamamatsu, Japon

Toshiya Itô

Département d'oto-rhino-laryngologie, chirurgie de la tête et du cou, École supérieure de médecine, Université des Ryukyus, Okinawa, Japon

Taro Ikegami et Mikio Suzuki

Département d'oto-rhino-laryngologie, Hôpital général Seirei Hamamatsu, Hamamatsu, Japon

Jun Okamura

Département d'oto-rhino-laryngologie, Hôpital général Seirei Mikatahara, Hamamatsu, Japon

Yoshihiro Noda

Département de pathologie régénérative et infectieuse, École de médecine de l'Université de Hamamatsu, Hamamatsu, Japon

Toshihide Iwashita et Hideya Kawasaki

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HK, KM et SY ont conçu l'étude et conçu les expériences. SY, TI, TI, DM, RI, YT, JO et YN ont mené des expériences. SY, AI, HN, JK, YN, TI, TH, MS et KM ont effectué une analyse des données. Tous les auteurs ont rédigé le manuscrit, révisé ses ébauches, approuvé la version finale et accepté sa soumission.

Correspondance à Kiyoshi Misawa ou Hideya Kawasaki.

Les auteurs ne déclarent aucun intérêt concurrent.

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Réimpressions et autorisations

Yamada, S., Itoh, T., Ikegami, T. et al. Association entre la production de particules de papillomavirus humain et la sévérité de la papillomatose respiratoire récurrente. Sci Rep 13, 5514 (2023). https://doi.org/10.1038/s41598-023-32486-8

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Reçu : 23 janvier 2023

Accepté : 28 mars 2023

Publié: 06 avril 2023

DOI : https://doi.org/10.1038/s41598-023-32486-8

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